sem負染色

1、負染色法的染色劑

就透射電子顯微鏡來說，原子所帶電子的不透明度與其原子序數有關，也就是和版核外電子數權有關。所以應選擇有較強的電子散射能力且易被生物吸附的試劑作為負染色劑，一些常用的負染色劑有鉬酸銨、乙酸鈾醯、甲酸鈾醯（英語：Uranyl formate）、磷鎢酸、四氧化鋨、鋨鐵氰化鉀等[2]。使用負染色法可以看到普通光學顯微鏡下無法看清的結構。該方法主要用於觀察病毒、細菌、細菌鞭毛、生物膜等結構，這些結構的電子散射能力均較低[3]。

2、何謂負染色

負染色(negative stainning)
用重金屬copy鹽(如磷鎢酸鈉、醋酸鈾等)對鋪展在載網上的樣品進行染色，使整個載網都鋪上一層重金屬鹽，而有凸出顆粒的地方則沒有染料沉積。由於電子密度高的重金屬鹽包埋了樣品中低電子密度的背景，增強了背景散射電子的能力以提高反差，這樣，在圖像中背景是黑暗的，而未被包埋的樣品顆粒則透明光亮，這種染色稱為負染技術。負染色是只染背景而不染樣品，與光學顯微鏡樣品的染色正好相反。
電子染色的一種方法，背景是高電子密度區，樣品是低電子密度區，在電鏡下形成負的反差，主要用於病毒等生物大分子的觀察方法。

3、負染色電鏡技術要超薄切片么?如果不切片用什麼顯微鏡觀察?

不用進行超薄切片,只要用電子顯微鏡觀察就可以了.

4、什麼樣的材料做透射電鏡需要負染色 我的材料是PLGA-PEI做成的微球，請問做TEM需要染色嗎？

做負染來的目的是為了增加源襯度，獲得一張圖片希望不同物質的襯度我明顯的對比，由於TEM是透射光的投影，如果厚薄一樣，襯度一樣，是沒法區分不同物質的，做了負染可以增加襯度，這樣才能清楚的分析，特別是生物樣品，如果不做負染，拍的圖片襯度很差，基本上都是白色

PLGA-PEI的微球樣品，不一定要做負染，不過有條件的話還是建議做一下，用做了和沒做的，做個對比，選擇好的就行

5、對負染色劑敏感的樣品,如何負染色？

　某些結構，如線粒體基粒、核糖體和蛋白質及其組裝成的纖維甚至病毒等，內可以通過負染色（negative staining）電鏡容技術觀察其精細結構。其解析度可達1.5nm左右。負染色是用重金屬鹽，如磷鎢酸或蠟酸雙氧鈾，對鋪展在載網上的樣品進行染色，吸去多餘染料，樣品經過自然乾燥後，整個載網上都鋪上了一薄層重金屬鹽，從而襯托出樣品的精細結構。

6、負染色法的負染色法

負染色法(negative staining)染色處理過程主要並非針對菌體本身，故又稱「襯托染色法版」。是一種易於在電子權顯微鏡下觀察試樣的微細結構的方法。它是用磷鎢酸鈉、醋酸氧鈾等電子密度高的物質，嵌入生物試樣的間隙，根據產生的對比進行觀察，而非原來意義上的物質染色。它與通常在電子顯微鏡中所得的陽面物像不同，而是陰面物像，因而有此名稱。解像力可達0.5微米以下。
最早由S.Brenner和R.Horne，（1959）用於 ，以後利用此法很快地積累了病毒、細菌以及分層蛋白質的微細結構等方面的知識。
負染色法需要使用酸性染料來染色，如伊紅或苯胺黑。因為細菌體表面帶負電，而酸性染料的色原也帶負電，所以色原只能將背景染色。沒有染色的細胞在染色背景下就能很容易的觀察到。在負染色法中，標本不需要熱固定，細胞不會因為化學葯物的影響而變形，對於不易染色的細菌或病毒也能觀察。
負染色法 此種染色法之染色處理過程主要並非針對菌體本身，故又稱「間接染色法」。 所用之染劑系因陰離子呈色，所以無法對同樣帶陰電荷之菌體細胞呈色，而於染色處理時會在細胞周圍形成沉澱，這種情形即稱為陰性或間接染色。又稱背景染色法

7、脂質體 拍電鏡用什麼染色,即用什麼負染劑

磷鎢酸負染法

脂質體用磷鎢酸負染後滴在有支持膜的銅網上，乾燥後用JEM-200透視電鏡觀察並攝影

8、鉬酸銨負染色液 怎麼配

負染色又抄稱陰性染色，是襲由Hall發現的相對於普通染色(即正染色)而言的染色技術。其原理在於利用重金屬鹽包繞低電子密度的樣品，增強樣本四周的電子密度，造成細微結構之間的＂質量－厚度」差異，增強散射吸收反差，鉬酸銨負染色液(3%)適用於顯示大分子、細菌、病毒、原生動物、噬菌體、細胞器、核酸大分子、蛋白質晶體及其他大分子材料等。染色後的樣品圖像呈現透明的亮光，而背景圖像呈黑色。
操作步驟(僅供參考)：
(一)滴染法
1、樣品低速離心或採用其他方法濃縮樣品，製成懸浮液並且使其達到一定濃度和純度。
2、將樣品懸浮液直接滴於帶有支持膜的載網上靜置。
3、用濾紙條從液滴邊緣吸去多餘液體，稍乾燥
4、 滴加負染靜置。
5、吸去多餘染色液，自然乾燥，進行顯微鏡觀察。
(二)漂浮法
1、樣品低速離心或採用其他方法濃縮樣品，製成懸浮液並且使其達到一定濃度和純度。
2、將帶有支持膜的載網置於樣品液滴上漂浮以沾取樣品。
3、載網置於負染色液上漂浮。
4、吸去多餘染色液，自然乾燥，進行顯微鏡觀察。

9、負染色法的操作方法

試劑：苯胺黑染色液 或 伊紅染色液 等酸性染料
器材：酒精燈（或本生燈）、接種專環、染色盤、玻片、拭鏡紙及屬顯微鏡。 ①取一小滴苯胺黑染色液，滴於潔凈玻片之一端。
②以無菌操作取一接種環之培養，置入苯胺黑染色液中，混勻。
③取另一玻片（或蓋玻片）其一端置於苯胺黑色液之前，並呈 30 度狀態，向他端推去，使混和液成一薄塗膜。
④將玻片置空氣中乾燥，不宜以熱固定。
⑤以油鏡觀察之。

10、什麼是電鏡負染技術

電鏡負染技術就是用重金屬鹽如磷鎢酸或醋酸雙氧鈾對鋪展在載網上的樣品進行染色；吸去染料，樣品乾燥後，樣品凹陷處鋪了一薄層重金屬鹽，而凸的出地方則沒有染料沉積，從而出現負染效果。