sem负染色

1、负染色法的染色剂

就透射电子显微镜来说，原子所带电子的不透明度与其原子序数有关，也就是和版核外电子数权有关。所以应选择有较强的电子散射能力且易被生物吸附的试剂作为负染色剂，一些常用的负染色剂有钼酸铵、乙酸铀酰、甲酸铀酰（英语：Uranyl formate）、磷钨酸、四氧化锇、锇铁氰化钾等[2]。使用负染色法可以看到普通光学显微镜下无法看清的结构。该方法主要用于观察病毒、细菌、细菌鞭毛、生物膜等结构，这些结构的电子散射能力均较低[3]。

2、何谓负染色

负染色(negative stainning)
用重金属copy盐(如磷钨酸钠、醋酸铀等)对铺展在载网上的样品进行染色，使整个载网都铺上一层重金属盐，而有凸出颗粒的地方则没有染料沉积。由于电子密度高的重金属盐包埋了样品中低电子密度的背景，增强了背景散射电子的能力以提高反差，这样，在图像中背景是黑暗的，而未被包埋的样品颗粒则透明光亮，这种染色称为负染技术。负染色是只染背景而不染样品，与光学显微镜样品的染色正好相反。
电子染色的一种方法，背景是高电子密度区，样品是低电子密度区，在电镜下形成负的反差，主要用于病毒等生物大分子的观察方法。

3、负染色电镜技术要超薄切片么?如果不切片用什么显微镜观察?

不用进行超薄切片,只要用电子显微镜观察就可以了.

4、什么样的材料做透射电镜需要负染色 我的材料是PLGA-PEI做成的微球，请问做TEM需要染色吗？

做负染来的目的是为了增加源衬度，获得一张图片希望不同物质的衬度我明显的对比，由于TEM是透射光的投影，如果厚薄一样，衬度一样，是没法区分不同物质的，做了负染可以增加衬度，这样才能清楚的分析，特别是生物样品，如果不做负染，拍的图片衬度很差，基本上都是白色

PLGA-PEI的微球样品，不一定要做负染，不过有条件的话还是建议做一下，用做了和没做的，做个对比，选择好的就行

5、对负染色剂敏感的样品,如何负染色？

　某些结构，如线粒体基粒、核糖体和蛋白质及其组装成的纤维甚至病毒等，内可以通过负染色（negative staining）电镜容技术观察其精细结构。其分辨率可达1.5nm左右。负染色是用重金属盐，如磷钨酸或蜡酸双氧铀，对铺展在载网上的样品进行染色，吸去多余染料，样品经过自然干燥后，整个载网上都铺上了一薄层重金属盐，从而衬托出样品的精细结构。

6、负染色法的负染色法

负染色法(negative staining)染色处理过程主要并非针对菌体本身，故又称“衬托染色法版”。是一种易于在电子权显微镜下观察试样的微细结构的方法。它是用磷钨酸钠、醋酸氧铀等电子密度高的物质，嵌入生物试样的间隙，根据产生的对比进行观察，而非原来意义上的物质染色。它与通常在电子显微镜中所得的阳面物像不同，而是阴面物像，因而有此名称。解像力可达0.5微米以下。
最早由S.Brenner和R.Horne，（1959）用于 ，以后利用此法很快地积累了病毒、细菌以及分层蛋白质的微细结构等方面的知识。
负染色法需要使用酸性染料来染色，如伊红或苯胺黑。因为细菌体表面带负电，而酸性染料的色原也带负电，所以色原只能将背景染色。没有染色的细胞在染色背景下就能很容易的观察到。在负染色法中，标本不需要热固定，细胞不会因为化学药物的影响而变形，对于不易染色的细菌或病毒也能观察。
负染色法 此种染色法之染色处理过程主要并非针对菌体本身，故又称「间接染色法」。 所用之染剂系因阴离子呈色，所以无法对同样带阴电荷之菌体细胞呈色，而于染色处理时会在细胞周围形成沉淀，这种情形即称为阴性或间接染色。又称背景染色法

7、脂质体 拍电镜用什么染色,即用什么负染剂

磷钨酸负染法

脂质体用磷钨酸负染后滴在有支持膜的铜网上，干燥后用JEM-200透视电镜观察并摄影

8、钼酸铵负染色液 怎么配

负染色又抄称阴性染色，是袭由Hall发现的相对于普通染色(即正染色)而言的染色技术。其原理在于利用重金属盐包绕低电子密度的样品，增强样本四周的电子密度，造成细微结构之间的＂质量－厚度”差异，增强散射吸收反差，钼酸铵负染色液(3%)适用于显示大分子、细菌、病毒、原生动物、噬菌体、细胞器、核酸大分子、蛋白质晶体及其他大分子材料等。染色后的样品图像呈现透明的亮光，而背景图像呈黑色。
操作步骤(仅供参考)：
(一)滴染法
1、样品低速离心或采用其他方法浓缩样品，制成悬浮液并且使其达到一定浓度和纯度。
2、将样品悬浮液直接滴于带有支持膜的载网上静置。
3、用滤纸条从液滴边缘吸去多余液体，稍干燥
4、 滴加负染静置。
5、吸去多余染色液，自然干燥，进行显微镜观察。
(二)漂浮法
1、样品低速离心或采用其他方法浓缩样品，制成悬浮液并且使其达到一定浓度和纯度。
2、将带有支持膜的载网置于样品液滴上漂浮以沾取样品。
3、载网置于负染色液上漂浮。
4、吸去多余染色液，自然干燥，进行显微镜观察。

9、负染色法的操作方法

试剂：苯胺黑染色液 或 伊红染色液 等酸性染料
器材：酒精灯（或本生灯）、接种专环、染色盘、玻片、拭镜纸及属显微镜。 ①取一小滴苯胺黑染色液，滴于洁净玻片之一端。
②以无菌操作取一接种环之培养，置入苯胺黑染色液中，混匀。
③取另一玻片（或盖玻片）其一端置于苯胺黑色液之前，并呈 30 度状态，向他端推去，使混和液成一薄涂膜。
④将玻片置空气中干燥，不宜以热固定。
⑤以油镜观察之。

10、什么是电镜负染技术

电镜负染技术就是用重金属盐如磷钨酸或醋酸双氧铀对铺展在载网上的样品进行染色；吸去染料，样品干燥后，样品凹陷处铺了一薄层重金属盐，而凸的出地方则没有染料沉积，从而出现负染效果。